干粉培養(yǎng)基在使用之前必須進(jìn)行滅菌處理，將其所含活菌全部殺死或全部除去。常用的滅菌方法有過(guò)濾除菌、干熱滅菌、濕熱滅菌及輻照滅菌等。
 

　　其中，濕熱滅菌法又包括四種方式:煮沸法、流動(dòng)蒸汽滅菌法、間歇滅菌法和壓力蒸汽滅菌法。通常來(lái)說(shuō)，使用比較多的是壓力蒸汽滅菌法。
 

　　但是對(duì)于有些培養(yǎng)基來(lái)說(shuō)，高壓條件會(huì)損壞培養(yǎng)基中的某些成分，不利于培養(yǎng)基的使用，所以只能采用煮沸滅菌的處理方法。本文主要就煮沸滅菌方法進(jìn)行討論。
 

　　有關(guān)煮沸滅菌的描述，通常有如下幾種方式:
 

　　a、稱取本品41. 5g，加熱溶解于1000mL蒸餾水中，煮沸不要超過(guò)2分鐘。無(wú)需高壓滅菌。臨用時(shí)制備，不得超過(guò)3小時(shí)。
 

　　b、稱取本品50. 3g，加入1000mL蒸餾水中，加熱煮沸至*溶解，冷至45-50℃， 搖勻，傾入無(wú)菌平皿備用。無(wú)需高壓滅菌。
 

　　c、稱取本品89g，煮沸溶解于1000mL蒸餾水中，冷至45-50℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，備用。注:無(wú)需高壓滅菌。
 

　　d、稱取本品57g，加熱攪拌溶解于1000mL蒸餾水中，不要過(guò)分加熱，冷至50-55℃時(shí)，傾入無(wú)菌平皿，部分開蓋干燥2h，然后蓋上，備用。無(wú)需高壓滅菌。在24小時(shí)內(nèi)使用。
 

　　這些方法描述中，都特別強(qiáng)調(diào)“無(wú)需高壓滅菌”、“不要過(guò)分熱”、“煮沸充分溶解”，那么究竟該怎樣操作，才能達(dá)到既滅菌*又盡量降低對(duì)培養(yǎng)基的破壞呢?
 

　　煮沸滅菌的實(shí)際操作
 

　　1、關(guān)于煮沸方式，有人提出可以隔水煮沸，但經(jīng)過(guò)反復(fù)試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)這種煮沸方式存在兩大弊端:①溫度不夠，達(dá)不到滅菌效果;②經(jīng)隔水煮沸的含瓊脂培養(yǎng)基，在水浴的過(guò)程中易出現(xiàn)分層現(xiàn)象。
 

　　2、為了對(duì)培養(yǎng)基進(jìn)行有效煮沸滅菌，根據(jù)我們實(shí)踐摸索，建議如下操作:
 

　?、贉?zhǔn)備好電磁爐和搪瓷缸(不要用鐵質(zhì)容器) ;
 

　　②將培養(yǎng)基按比例加水，稱量至搪瓷缸中，用玻璃棒不斷攪拌，直至*溶解、無(wú)明顯團(tuán)狀物或顆粒;
 

　?、蹖⑻麓筛字糜陔姶艩t上，大火燒開，期間持續(xù)攪拌，避免糊底;當(dāng)液面*沸騰后，立即將搪瓷缸從電磁爐上拿開，算是一次煮沸操作;液面回落后，立即放回電磁爐，重復(fù)上面的步驟;總共煮沸3次即可。
 

　?、軐⒅蠛玫呐囵B(yǎng)基冷卻至需要的溫度，進(jìn)行傾注平皿等操作。